维普资讯 http://www.cqvip.com －ｌ８９６・ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｍａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２００７，２３（１０）：１８９６—１８９９ ［文章编号］１０００—４７１８（２００７）１０—１８９６—０４ 血管内皮生长因子对外周血内皮祖细胞功能的影响 张文斌， 宋筱筱， 方英，傅国胜 （浙江大学医学院附属邵逸夫医院心内科，浙江杭州３１０００９） ［摘要］ 目的：观察不同浓度血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）对体外培养人外周血内皮祖细胞（ＥＰＣｓ）生物学 功能的影响，探讨ＶＥＧＦ促进ＥＰＣｓ生长的合适浓度。方法：密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞 （ＭＮＣｓ），接种至人纤维连接蛋白（ＨＦＮ）包被的培养板上，培养４ ｄ后收集贴壁细胞，换用配有不同浓度（对照组、 ｌＯ ｇ／Ｌ、２Ｏ ｇ／Ｌ、５Ｏ ／Ｌ）ＶＥＧＦ的培养基继续培养３ ｄ后进行细胞免疫组化鉴定ＥＰＣｓ，采用ＭＴＹ比色法、改良 的Ｂｏｙｄｅｎ小室和黏附能力测定实验，观察ＥＰＣｓ的增殖、迁移和黏附能力。结果：从人外周血能成功分离ＥＰＣｓ细 胞，并能分化为血管内皮细胞；从冠心病患者分离的ＥＰＣｓ增殖能力较非冠心病患者弱；ＶＥＧＦ在较低浓度（１Ｏ ｇ／Ｌ 和２Ｏ ｇ／Ｌ）时即能显著促进ＥＰＣｓ生长的各项生物学指标，但高浓度（５Ｏ ｇ／Ｌ）时并不能进一步增强这一效应；低 浓度（１Ｏ ｇ／Ｌ）下ＶＥＧＦ对冠心病患者作用较非冠心病患者弱，高浓度时对两者促进作用相近。结论：冠心病患者 ＥＰＣｓ功能显著减弱，较低浓度的ＶＥＧＦ即可显著增强ＥＰＣｓ的各项生物学功能，可能对损伤血管的再内皮化有益。 ［关键词］ 内皮生长因子；内皮祖细胞；冠状动脉疾病 ［中图分类号］ Ｒ３６３ ［文献标识码］ Ａ Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ＺＨＡＮＧ Ｗｅｎ—ｂｉｎ，ＳＯＮＧ Ｘｉａｏ—ｘｉａｏ，ＦＡＮＧ Ｙｉｎｇ，ＦＵ Ｇｕｏ—ｓｈｅｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｓ Ｒｕｎ Ｒｕｎ Ｓｈａｗ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｅｊｍｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１０００９，Ｃｈｉ・ ，ｌ口．Ｅ—ｍａｉｌ：ｆｕｇｓ＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｃｏｒｎ．ｃｎ） ［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ ＡＩＭ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉＭ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃ・ ｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒｌａ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ（ＥＰＣｓ）ａｎｄ ｔｏ ｉｆｎｄ ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＥＰＣｓ． ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｏｔｌａ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ（ＭＮＣｓ）ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐｅｒｉｐｈｅｒｌａ ｂｌｏｏｄ ｂｙ ｄｅｎｓｉｔｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｐｌａｔｅｄ ｏｎ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ—ｃｏａｔｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｄｉｓｈｅｓ．Ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｏｒ ４ ｄａｙｓ，ａｔｔａｃｈｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ ｉｎ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（０，１０，２Ｏ ｎａｄ ５０ ｇ／Ｌ）ｆｏｒ ７２ ｈ，ｔｈｅｎ ａｔｔａｃｈｅｄ ｃｅＨｓ ｗｅｒｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍ－ ｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．ＥＰＣ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｒｇａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ａｓｓａｙｅｄ ｗｉｔｈ ＭＴＹ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｍｏｄｉｉｆｅｄ Ｂｏｙｄｅｎ ｃｈａｍｂｅｒ ｓａｓａｙ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＥＰＣ ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｓｓａｙ Ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｒｅｐｌａｔｉｎｇ ＭＮＣｓ ｏｎ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ—ｃｏａｔｅｄ ｄｉｓｈｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ａｄ－ ｈｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｕｎｔｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｔｈｅ ＥＰＣｓ ｆｒｏｍ ＭＮＣｓ ｗｅｌｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｔｏ ｅｎｄｏｔｈｅ－ ｌｉｌａ ｃｅｌｌｓ（ＥＣｓ）．Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ＭＮＣｓ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ，ｍｉｒｇａｔｏｒｙ ｎａｄ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｃａｐａｃ－ ｉｔｉｅｓ ｏｆ ＥＰＣｓ，ａｎｄ ｔｈｉｓ ｅｆｅｃｔ Ｗａｓ ｍｏｓｔ ｐｒｏｍｉｎｅｎｔ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ Ｗａｓ ２０ ｇ／Ｌ ａｆｔｅｒ ７２ ｈｏｕｒｓ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｎｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ，ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＰＣｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍａｓｃｕｌｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉｏｇｒａｐｈｙ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＥＰＣｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉｏｇｒａｐｈｙ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＥＰＣｓ ａｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍａｓｃｕｌｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｏｗ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ ｍａｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｆｕｎｃ— ｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＥＰＣｓ． ［ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ］ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ；Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ；Ｃｏｒｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ 基础与临床应用研究均证实抗增殖治疗能显著 能缺失，导致各种生长、趋化因子与内膜下组织接 减少介入治疗后血管内膜增殖反应，降低再狭窄率。 触，从而启动和促进血管新生内膜的过度生长。因 但是，抗增殖治疗也可导致局部内皮细胞生长不良， 此，如何加速、改善和促进局部血管再内皮化是新一 血管再内皮化延迟，血栓形成，还可能因内皮屏障功 代药物涂层支架必须解决的问题和主要发展方 ［收稿日期］２００５一ｌ２一ｌ４ ［修回日期］２００６—０４—０３ ［基金项目］浙江省科学技术基金资助项目（Ｎｏ，２００４Ｃ３３０４５） △通讯作者Ｅ—ｍａｉｌ：ｆｕｇｓ＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｔｏｍ，ｃｎ 维普资讯 http://www.cqvip.com ・ｌ８９７・ 向¨ 。已有研究证实，作为内皮细胞前体的内皮祖 义病变），冠心病组７例和非冠心病组８例。单个核 细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ）在内皮损伤 细胞培养至第４ ｄ，收集贴壁细胞，采用含不同浓度 修复和血管新生中发挥重要作用 ｊ。但人体循环中 ＶＥＧＦ（０．０ ｇ／Ｌ、１０．０ ｇ／Ｌ、２０．０ ｇ／Ｌ、５０．０ ｇ／Ｌ） ＥＰＣｓ的数量仅为（０．５×１０。一１×１０。）ｃｅｌｌｓ／Ｌ，因此 的培养基分组培养，至第７ ｄ收集贴壁细胞进行实 如何促进ＥＰＣｓ在损伤血管段黏附，并促进其与 验。 生长，可能是解决这一问题的途径之一。本研究拟 ４ ＥＰＣｓ生物功能检测 观察不同浓度ＶＥＧＦ对体外培养人外周血ＥＰＣｓ生 ４．１ 黏附能力 将贴壁细胞用含有不同浓度ＶＥＧＦ 物学功能的影响，并探讨ＶＥＧＦ促进ＥＰＣｓ生长 的培养液培养２４ ｈ后，用０．２５％胰蛋白酶消化收集 的合适浓度。 材料和方法 １材料与试剂 人纤维连接蛋白（ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＨＦＮ）购自 Ｓｉｇｍａ公司。人内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅ． １ｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）购自Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司。Ｏｐｔｉ． ｐｒｅｐⅢ购自ＡＸＩＳ—ＳＨＩＥＬＤ ＰＯＣ ＡＳ公司。改良的 Ｂｏｙｄｅｎ小室购自江苏海门麒麟医用仪器厂。Ｍ１９９、 青一链霉素、胰蛋白酶购自吉诺生物医药技术有限 公司。胎牛血清购自中美合资兰州民海生物工程有 限公司。兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体、小鼠 抗人ＣＤ３１、ＣＤ３４单克隆抗体、免疫组化染色试剂 盒、浓缩型ＤＡＢ试剂盒均购自北京中杉金桥生物技 术有限公司。 ２ ＥＰＣｓ的分离、培养与鉴定 采集住院病人空腹外周血１５ ｍＬ，肝素抗凝，ｏｐ． ｔｉｐｒｅｐ 分离液与血液１：８混匀，用密度梯度离心 ２ ８００ ｒ／ｍｉｎ，３０ ｍｉｎ，吸取单个核细胞层，用磷酸盐缓 冲液（ＰＢＳ）洗涤２次，将其铺在包被有人纤维连接蛋 白的培养板上。采用Ｍ１９９培养基（含２０％胎牛血 清，青霉素１×１０ Ｕ／Ｌ，链霉素１×１０ Ｕ／Ｌ）、３７ ｃＣ、 ５％ＣＯ，培养ＥＰＣｓ。ＥＰＣｓ的鉴定：将无菌盖玻片放 进培养板内，铺上人纤维连接蛋白，加入细胞悬液制 成细胞爬片，培养７ ｄ后，取出盖玻片，ＰＢＳ漂洗，丙 醛固定细胞１０ ｍｉｎ，３％Ｈ：Ｏ 去离子水孵育５— １０ ｍｉｎ，ＰＢＳ浸泡５ ｍｉｎ，滴加正常山羊血清工作液 ｌ０—１５ ｍｉｎ，倾去，滴加Ｉ抗（兔抗人Ⅷ因子相关抗 原多克隆抗体、小鼠抗人ＣＤ３１、ＣＤ３４单克隆抗体）， ４℃过夜，ＰＢＳ冲洗，滴加生物素化Ⅱ抗工作液，ＰＢＳ 冲洗，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，ＤＡＢ显 色，苏木素复染，梯度乙醇脱水后封片。 ３对象与实验分组 排除有外伤、溃疡、视网膜病、炎症、肿瘤、近期 外科手术、近３个月发生急性心肌梗死者，人选病人 ｌ５例。根据美国心脏病协会所规定的冠状动脉血管 图像记分分段评价标准（直径狭窄ｉ＞５０％判为有意 贴壁细胞，悬浮在培养液中吹打均匀，计数，然后将 同等数目的ＥＰＣｓ接种在包被有人纤维连接蛋白的 培养板上，３７￣Ｃ、５％ＣＯ２培养３０ ｍｉｎ，随机取３个高 倍镜视野（×２００）计数贴壁细胞 。 ４．２迁移能力 将贴壁细胞用含有不同浓度ＶＥＧＦ 的培养液培养２４ ｈ后，如上述收集贴壁细胞并计数。 将含有ＶＥＧＦ ５０ ｔＬｇ／Ｌ的培养液注入改良的Ｂｏｙｄｅｎ 小室的下室，盖上滤膜和上室，将含有等量约２×１０ 个ＥＰＣｓ悬液５０ ，注入上室，培养２４ ｈ，取出滤膜， 用消毒棉签刮去滤膜上面的未移动细胞，用甲醇固 定，Ｇｉｅｍｓａ染色，随机选择３个显微镜视野（×２００）， 计数迁移到滤膜下面的细胞 。 ４．３增殖能力检测 如上述方法收集贴壁细胞并计 数。再将等量ＥＰＣｓ悬液２００ 接种到包被有人纤维 连接蛋白的９６孔培养板，继续培养２ ｄ，用不含胎牛血 清的Ｍ１９９培养液培养２４ ｈ后，换含有不同浓度ＶＥＧＦ 的培养液，设对照组和空白组，每组重复６孔，培养２４ ｈ 后，每孔加￣ｒｒ（５ ｇ／Ｌ）２０ ，继续培养４ ｈ后，吸弃上 清液，再加入二甲基亚砜（１５０ 工／ｗｅｌ１），于微量振荡器 充分振荡１０ ｍｉｎ，置酶标仪于波长４９０ ｎｍ处测吸光 度（Ａ）值。 ５统计学处理 计量资料以均数±标准差（元±Ｓ）表示，用ＳＰＳＳ １２．０软件作统计学处理，采用单因变量多因素方差 分析，组间资料两组比较应用ｔ检验，多组比较应用 ＬＳＤ法。 结 果 １病人资料 人选患者的冠心病危险因素在单因变量多因素 统计过程中采用Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ评分作为协变量进行平 衡控制，未发现Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ评分对各组实验结果有 显著影响（Ｐ＞０．０５）。 ２ ＥＰＣｓ的鉴定 刚分离获得的单个核细胞是圆形的，体积较小， 悬浮于培养液中。培养４ ｄ后收集贴壁细胞继续培 养至７ ｄ，贴壁细胞体积逐渐增大，大部分细胞由圆 维普资讯 http://www.cqvip.com
・ｌ８９８・ 形逐渐伸展变成长梭形内皮样细胞，小部分细胞呈 鹅卵石样内皮形态。部分细胞形成集落，中心是圆 形细胞，四周呈放射样排列长梭形细胞。也有部分 长梭形细胞首尾相连排列成线形。分别用兔抗人Ⅷ 因子相关抗原多克隆抗体（图１）、小鼠抗人ＣＤ３１、 ＣＤ３４单克隆抗体检测第４、７ ｄ贴壁细胞表面相关抗 原的表达（图２、图３），结果均呈阳性，即具有ＥＰＣｓ 生物学特征。 ３ ＶＥＧＦ对外周血ＥＰＣｓ生物学功能的影响 从冠心病患者分离的ＥＰＣｓ：Ｌ￣殖能力较非冠心 Ｆｉｇ ３ Ｏｎ ｄａｙ ７．ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ａｔｔａｃｈｅｄ ｃｅｌｌｓ ｓｈｏｗｅｄ ＣＤ３４ ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＤＡＢ ｓｔａｉｎｉｎｇ．×ｌ００）． 图３第７ ｄ贴壁细胞免疫化学染色ＣＤ３４阳性 病患者弱（表２）。ＶＥＧＦ在较低浓度（１０ ｇ／Ｌ和 Ｉ ， －２０ Ｌ）时即能显著促进ＥＰＣｓ生长的各项生物学 指标，但高浓度（５０ Ｌ）时并不能进一步增强这一 Ｌ）ＶＥＧＦ对冠心病患 效应（表１）。低浓度下（１０ 苎纛， 。 一 摹： 者作用较非冠心病患者弱，高浓度时对两者促进作 用相近（表２）。 表１不同浓度ＶＥＧＦ对ＥＰＣｓ生物学功能的影响 Ｔａｂ ｌ Ｅｆｌｅｅｔ ｏｆ ＶＥＧＦ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏ— ｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＰＣｓ（ ４－ｓ．ｎ＝１５） Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｒｏｕＤ Ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ／Ａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｅｌｌｓ／ ‘ （Ａ４９０）ＨＰ（×２００）ＨＰ（×２００） Ｐ＜０．０５ ＵＳ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ； Ｐ＜０．０５ ＵＳ １０ Ｌ 讨 论 ＥＰＣｓ是一类能够增殖并分化为血管内皮细胞， Ｆｉｇ ２ Ｏｎ ｄａｙ ７．ｉｍｍｕｎｏｅｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ａｔｔａｃｈｅｄ ｃｅｌｌｓ 但尚未表达成熟血管内皮细胞表型，也是形成新生 ｓｈｏｗｅｄ ＣＤ３１ ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ＤＡＢ ｓｔａｉｎｉｎｇ，×１００）． 血管的前体细胞 。研究发现，ＥＰＣｓ不仅参与血管 形成（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）与出生后血管生成（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅ一 图２第７ ｄ贴壁细胞免疫化学染色ＣＤ３１阳性 表２ 同一浓度ＶＥＧＦ对冠心病和非冠心病患者ＥＰＣｓ生物学功能的影响 Ｔａｂ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＶＥＧＦ ｗｉｔｈ ｓａｍｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＰＣｓ ｆｒｏｍ ＣＡＤ（ｃｏｒｏｎａｙ ｒａ￣ｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｎｏｎ —ＣＡＤ ｐａｔｉｅｎｔｓ（盂４－Ｓ） Ｐ＜０．０５．”Ｐ＜０．０１／）３ ｎｏｎ—ＣＡＤ 维普资讯 http://www.cqvip.com ・ｌ８９９・ ｓｉｓ），同时也是血管损伤后内皮修复的主要前体细 １×１０。）ｃｅｌｌｓ／Ｌ，而且最近的研究发现，冠心病患者 ９７２． Ｗａｌｔｅｒ ＤＨ，Ｒｉｎｉｇ Ｋ，Ｂａｈｌｍａｎｎ ＦＨ，ｅｔ ａ１．Ｓｔａｔｉｎ ｔｈｅｒａｐｙ 胞 Ｊ。然而人体循环中ＥＰＣｓ的数量仅为（０．５×１０。 ［３］ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ ｒｅ—ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ｅｆｆｌｅｃｔ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄ 一循环ＥＰＣｓ的数量以及其迁移活性明显受损 Ｊ，并与 冠状动脉粥样硬化程度呈正相关 Ｊ。因此，如何促 进ＥＰＣｓ在损伤血管段黏附，并促进其与生长， 可能是解决这一问题的重要途径之一。 ＶＥＧＦ是一种对血管内皮细胞具有高度特异性 ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０５ （２５）：３０１７—３０２４． ［４］ Ａｓａｈａｒａ Ｔ，Ｍｕｒｏｈａｒａ Ｔ，Ｓｕｌｌｉｖａｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］． Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７５（５３０２）：９６４—９６７． 的肝素结合蛋白，具有强烈促进动脉、静脉以及淋巴 ［５］ 杨德业，张怀勤，季亢挺，等．内皮组细胞在体外培养成 管来源的内皮细胞生长的作用，血管内皮细胞是 ＶＥＧＦ发挥作用的主要靶细胞 。ＶＥＧＦ通过ＥＰＣｓ 表达的ＶＥＧＦ受体一２（ＶＥＧＦＲ一２）激活蛋白激酶Ｃ， 通过二聚体化和配基依赖的酪氨酸磷酸化发挥促有 丝和抗凋亡等作用 Ｊ。研究证实，ＶＥＧＦ能明显 改善ＥＰＣｓ的黏附、迁移和增殖。Ｂａｎｎａｉ等¨ 证明２ —１０ ｍｉｎ的短暂心肌缺血后可以使心肌细胞内的 ＶＥＧＦ升高３—５倍。研究发现急性心肌梗死患者的 外周血ＣＤ３４ 单个核细胞（ＰＢＭＮＣ 嘲 ）和ＥＰＣｓ的 数量与血浆ＶＥＧＦ水平呈正相关。最近的研究表 明，ＶＥＧＦ能够促进人外周血ＥＰＣｓ的增殖和分化，并 在该过程中扮演着十分重要的角色¨ 幢Ｊ。虽然缺 血、缺氧可刺激ＶＥＧＦ表达，但正常心肌、血管组织 中ＶＥＧＦ含量极低¨引。因此，体外给予，特别是局部 给予ＶＥＧＦ可能是发挥其最大生物学效应必须和可 行的途径。本研究用不同浓度的ＶＥＧＦ与ＥＰＣｓ进 行共培养，试图进一步验证其生物学效应，并探讨 ＶＥＧＦ促进ＥＰＣｓ黏附、迁移和增殖等功能的恰当浓 度。结果显示，冠心病患者外周血分离的ＥＰＣｓ的数 量、生物学功能均显著下降，但较低浓度的ＶＥＧＦ即 能显著提高ＥＰＣｓ的各项生物学功能，２０ ｇ／Ｌ浓度 可能是较为合适的浓度，进一步增加浓度并不能加 强其对ＥＰＣｓ生物学功能的促进作用。 ［参考文献］ Ｋｉｐｓｈｉｄｚｅ Ｎ，Ｄａｎｇａｓ Ｇ，Ｔｓａｐｅｎｋｏ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎ— ｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｉｎ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２００４，４４（４）：７７３—７７９． ［２］ Ｍｕｒａｙａｍａ Ｔ，Ｔｏｐｐｅｒ ＯＭ，Ｓｉｌｖｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｓｉｇｎｉｆ－ ｉｃａｎｃｅ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ——ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ・・ ｉｓａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｈｅｍａｓｔｏｌ，２００２，３０（８）：９６７一 血管样结构的初步观察［Ｊ］．中国病理生理杂志，２００６， ２２（１０）：１９７０—１９７４． ［６］ Ｖａｓａ Ｍ，Ｆｉｃｈｔｌｓｃｈｅｒｅｒ Ｓ，Ａｉｃｈｅｒ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅ ｗｉｔｈ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓ— ｅａｓｅ［Ｊ］．Ｃｉｒｅ Ｒｅｓ，２００１，８９（１）：Ｅ１一Ｅ７． ［７］Ｈｉｌｌ ＪＭ，Ｚａｌｏｓ Ｃ，Ｈａｌｃｏｘ ＪＰ，ｅｔ ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉ— ａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ｖａｓｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｉｒｓｋ［Ｊ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２００３，３４８（７）：５９３—６００． ［８］Ｆｅｒｒａｒａ Ｎ，Ｄａｖｉｓ—Ｓｍｙｔｈ Ｔ．Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏ— ｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ，１９９７，１８（１）：４— ２５． ［９］Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｔ，Ｕｅｎｏ Ｈ，Ｓｈｙｂｕｙａ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＶＥＧＦ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｂｕｔ Ｒａｓ—ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｒａｆ ——ＭＥＫ—－ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ ｆｏｒ ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｐｒｉ・・ ｍａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９９，１８（１３）： ２２２ｌ一２２３０． ［１０］Ｂａｎｎａｉ Ｓ，Ｓｈｗｅｉｋｉ Ｄ，Ｐｉｎｓｏｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｖｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｇｅｎｅ— ｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ，１９９４，２８（８）：１１７６—１１７９． ［１ １］Ｗｉｊｅｌａｔｈ ＥＳ，Ｒａｈｍａｎ Ｓ，Ｍｕｒｒａｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ＶＥＧＦ—ｉｎｄｕｃｅｄ ＣＤ３４ ｃｅｌｌ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｖａｓｃ Ｓｕｒｇ，２００４，３９（３）：６５５— ６６０． ［１２］Ｈｅｎｒｉｃｈ Ｄ，Ｈａｈｎ Ｐ，Ｗａｈｌ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｒａｕｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎ— ｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ：ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒ－ ｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—ｂｅｔａ １ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １６５［Ｊ］．Ｓｈｏｃｋ，２００４，２１（１）：１３—１６． ［１３］Ｓｈｉｎｏｈａｒａ Ｋ，Ｓｈｉｎｏｈａｒａ Ｔ，Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍｙｏ— ｃａｒｄｉｌａ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅａｒｔ Ｖｅｓｓｅｌｓ，１９９６，１１（３）：１１３ —１２２．