整合子与细菌耐药性关系的研究进展

国外医药抗生素分册２００９年第３０卷第６期整合子与细菌耐药性关系的研究进展胡小行综述李国明审校（广东医学院微生物学与免疫学教研室，湛江５２４０２３）摘要：细菌耐药性是临床用药的一大难题，对其耐药机制探讨也就成为医学界研究热点，近年研究发现细菌耐药性产生与一种克隆表达载体——整合子密切相关。整合子是一种可移动基因元件，在整合酶的作用下捕获外源基因盒并使之表达，同时整合子又可整合到质粒上，或自身作为转座子的一个组成部分而参与转移，使耐药基因在不同种属问传播，目前整合子已成为革兰阴性杆菌产生耐药性的重要机制。本文就整合子与细菌多重耐药性关系作一综述。关键词：整合子；基因盒；耐药性中图分类号：Ｒ９７８．１文献标识码：Ａ文章编号：１００１．８７５１（２００９）０６—０２５５．０５ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＩｎｔｅｇｒｏｎｓａｎｄＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＢａｃｔｅｒｉａＨＵＸｉａｏ—ｈａｎｇ，ＬＩＧｕｏ・ｍｉｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔＡｂｓｔｒａｃｔ：ＤｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ５２４０２３，Ｃｈｉｎａ）ａｏｆｂａｃｔｅｒｉａｉｓｍａｊｏｒｐｒｏｂｌｅｍｔｈａｔｈａｒａｓｓｅｓｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ．Ｔｈｕｓ，ｍａｎｙｓｃｉｅｎｔｉｓｔｓｏｆｍｅｄｉｃａｌｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒ＿—一ｉｎｔｅ毋＿ｏｎ．Ｉｎｔｅｇｒｏｎｓｉｓｅｎｓｕｒｅｆｉｅｌｄｆｏｃｕｓｔｈｅｉｒａｔｔｅｎｔｉｏｎｏｎｔｏｔｈｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｓｏｍｅｓｔｕｄｉｅｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｓｃｌｏｓｅｌｙｌｉｎｋｅｄｃａｎｔｏａｋｉｎｄｏｆｍｏｂｉｌｅｇｅｎｅｔｉｃｅｌｅｍｅｎｔｓｔｈａｔｃａｐｔｕｒｅｅｘｏｇｅｎｏｕｓｇｅｎｅｃａｓｓｅｔｔｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｕｎｄｅｒｔｈｅａｓａｎａｃｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｇｒａｓｅｓ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｉｎｔｅｇｒｏｎｓＣａｎｂｅｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐｌａｓｍｉｄ，ｏｒｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆｉｎｔｅｇｒａｌｐａｒｔａｌｌｔｈｅｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ，ＳＯｔｈａｔｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｃａｎｓｐｒｅａｄａｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓ．Ｉｎｔｅｇｒｏｎｓｈａｖｅｂｅｃｏｍｅｐａｐｅｒｉｍｐｏｒｔａｎｔｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．ｂａｃｔｅｒｉａ．ＴｈｉｓｒｅｖｉｅｗｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｉｎｔｅｇｒｏｎａｎｄｍｕｌｔｉｄｒｕｇＫｅｙｗｏｒｄｓ：ｉｎｔｅｇｒｏｎ；ｇｅｎｅｃａｓｓｅｔｔｅ；ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ细菌耐药性问题给临床感染性疾病的治疗带来严峻挑战。过去，人们认为由于抗生素使用导致细菌基因突变积累是产生耐药性的重要原因。但后来发现，没有接触过抗生素的细菌也可产生耐药性，这表明耐药性具有可转移特点。近年来在细菌中发现了一种与耐药基因水平转移密切相关的克隆表达Ｓｔｏｋｅｓ等【２１提出整合子这一概念。整合子是一种基因单位，在整合酶的催化下，通过特异性结合位点捕获外源基因（特别是耐药基因）并使之表达，同时整合子又可整合到质粒或染色体上，或自身作为转座子的一个组成部分而参与转移【３】，使耐药基因在同种和不同种属细菌间广泛传播。１．１整合子的结构整合子由３部分组成（如图ｌ所示）：５’一保守末端（５’－ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ载体——整合子（ｉｎｔｅｇｒｏｎ）［¨。目前，整合子已成为革兰阴性菌产生耐药性的重要机制，成为研究细菌耐药传播机制的一大热点。ｌｓｅｇｍｅｎｔ，５‘ｃｓ）、３’一保守末端（３’一ｃｏｎｓｅｒｖｅｄｒｅ－整合子的结构和分类整合子是２０世纪８０年代在对耐药质粒和转座子ｓｅｇｍｅｎｔ，３’－ｃｓ）和两者之间的可变区（ｖａｒｉａｂｌｅｇｉｏｎ）。５’一ＣＳ包括编码整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ，ＩｎｔＩ）的基因ｊ丑ｆＪ、特异性重组位点ａｔｔＩ和整合子可变区启动子进行系统研究的过程中发现的，并于１９８９年首次由收稿日期：２００９－０５－０４作者简介：胡小行，在读硕士研究生，主要从事细菌耐药机制的研究。李国明，教授，硕士生导师，主要从事细菌耐药机制的研究。万方数据・２５６Ｐｔｍ；！哪ｌ答ｉｎｔ［萌｜蕊》孵警纛—一５・．你ｊ】，爪端ｉ可变Ｊｘ－ｉ３。保守末立：；；图１整合子结构Ｆｉｇｕｒｅ１ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｎｉｎｔｅｇｒｏｎＰａｎｔ。ＩｎｔＩ属于酪氨酸整合酶家族，催化基因盒在整合子上的整合和剪切，ａｔｔＩ位于整合酶基因的上游，是外源基因盒的整合位点；启动子Ｐａｎｔ指导下游可变区中自身无启动子的基因盒中基因的表达。３’一ＣＳ结构因整合子的种类不同而异。可变区可带有多个数量和功能不同的基因盒，但可变区并不是整合子的基本结构，有的整合子在５’．ＣＳ和３＇－ＣＳ之间没有基因盒插入。１．２整合子的分类整合子根据其编码整合酶的ＤＮＡ序列不同进行分类，可分为９类【４１，其中对Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ和ＩＶ类整合子的研究较多，前３种与细菌耐药基因传播密切相关，因此又称为耐药整合子（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｅｇｒｏｎ，ＲＩ）。Ｉ类整合子最常见，从临床菌株中发现的整合子大多属于此类。５’一ｃｓ有编码ＩｎｔＩｌ的基因ｉｎｔｌＩ、重组位点ａｔｔＩｌ和可变区启动子Ｐａｎｔ。大多数Ｉ类整合子的３’一ｃｓ含有ｓｕｌｌ，ｑａｃＥ、ａａｄＡ，ｄｆｒＡ，ｂｌａ基因，分别介导对磺胺类药物，季铵盐化合物、链霉素、甲氧苄啶、Ｄ－内酰胺类抗生素的耐药性，此外还含有一个可能与接合转座有关的可读框ＯＲＦ。【５】。可变区带有不同数量基因盒，大部分是编码各种抗生素抗性的耐药基因盒，分别介导对不同抗生素耐药。ＩＩ类整合子存在于Ｔｎ７或其衍生物上，其整合酶基因ｉｎｔｌ２中有一个终止密码子，编码有缺陷的整合酶Ｉｎｔｌ２，Ｉｎｔｌ２不能催化基因盒的整合与剪切。现已在不动杆菌、沙门菌和志贺菌中发现此类整合子，其中志贺菌属中的检出率最高，如在韩国分离的６７株宋内志贺菌中，此类整合子的检出率为１００％ｔ６１。ＩＩＩ类整合子最初是由Ａｒａｋａｗａ等ｆ７】在耐碳青霉烯类抗生素黏质沙雷菌的质粒上发现。目前在假单胞菌、肺炎克雷伯菌、木糖氧化产碱杆菌等革兰阴性菌中均分离出ＩＩＩ类整合子。ＩＶ类整合子是Ｍａｚｅｌ等…在霍乱弧菌基因组中首次发现的，它除了带有与细菌耐药性有关的基因外，还有与细菌的代谢和毒力有关的基因。此类整合子带有上百个基因盒，故又称为超级整合子（ｓｕｐｅｒｉｎｔｅｇｒｏｎ，ＳＩ）。ＩＶ类整合子主要在弧菌属中发现，在产碱假单胞菌和海利斯顿菌中也发现此类整合子。万方数据ＷｏｒｌｄＮｏｔｅｓｏｎＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２００９，Ｖ０１．３０，Ｎｏ．６２基因盒的结构基因盒是较小可移动基因元件，常以环状形式存在，也可整合到整合子中。目前发现的基因盒有８０多种，不同的基因盒具有不同的结构和功能，但基本结构是一致的。如图２所示，基因盒由一个单基因（通常为耐药基因）和一个短的回文序歹ｉＪａｔｔＣ组成。由于第一个被发现的ａｔｔＣ长度为５９ｂｐ，所以ａｔｔＣ又被称为５９．ｂｅ，ａｔｔＣ含有整合酶特异性识别位点，两端分别有一７个碱基对的片段，分别称为核心位，电（ｃｏｒｅｓｉｔｅ，ｃｓ）和反向核心位。点，（ｉｎｖｅｒｓｅｃｏｒｅｓｉｔｅ，ＩＣＳ）。核心位点的共同序列为ＧＴＴＲＲＲＹ（Ｒ：嘌呤，Ｙ：嘧啶），位于ａｔｔＣ的右侧，反向核心位点的共同序列为ＲＹＹＹＡＡＣ，位于ａｔｔＣ的左侧，中间有一个６０ｂｐ的不完全倒转重复序列，一旦转录ＲＮＡ形成茎・环结构，该结构也参与基因盒的移动。由于基因盒与整合子重组是发生在核心位点ＧＴＴ中的Ｇ和第一个Ｔ之间，因此核心位点ＧＴＴ、Ｇ左侧碱基及Ｔ突变都将严重影响基因盒整合频率。据有关文献【９］报道，当核心位点ＧＴＴ中的Ｇ与第二个Ｔ突变时，重组频率降到原来的１／４０，第二个Ｔ突变时降到原来的ｌ／１７０。大多数基因盒中不具有启动子，插入后必须借助于５’－ＣＳ的启动子Ｐａｎｔ才能得以表达。基因盒总是以相同的方向插入，并且多个整合子可以插入到同一个整合子上，这就是细菌产生多重耐药性重要原因。反向核心序列核心位点Ｌ－ｌ！！！：￡￡：：童：：：ｊ￡：：：：：三皇：：童｝丁ＴＲＰＦ：：。ｌ基因盒二：一位点注：ａｔｔＣ的范围在反向核心位点与核心位点之间，基因盒的范围则在２个核心位点之间。交叉点在１个核心位点的Ｇ碱基和下１个核心位点的Ｔ碱基之间图２整合子基因盒结构示意图Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂｌｏｃｋｄｉａｇｒａｍｏｆｉｎｔｅｇｒｏｎｇｅｎｅｃａｓｓｅｔｔｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ３整合子对基因盒的捕获与表达３．１整合子对基因盒的捕获在整合酶催化作用下，外源游离环状ＤＮＡ通过特异性识别位点整合于整合子上，成为整合子的一部分。整合过程中，基因只按５’专３’方向插入，多个基因盒依次排列，借助于整合子的启动子Ｐａｎｔ得以表达。整合酶主要识别位点有２个：一个是基因盒上的ａｔｔＣ位点，一个是整合子上的ａｔｔＩ位点。ａｔｔＩ位点比较保守，其长度为４０—７０ｂｐ，５’・Ｃ５有一个核心序列ＧＴＴＲＲＲＹ，而无互补的反向核心序列。重组位点位于核心序列ＧＴＴ中的Ｇ和下一个核心序列Ｔ之间，国外医药抗生素分册２００９年第３０卷第６期Ｇｒａｖｅ掣１０】发现ａｔｔＩ位点上有４个ＩｎｔＩ结合结构域，其中３个结合结构域具有ＧＴＴＡ保守序列。ａｔｔＣ位点序列和长度具有多样性，ａｔｔＣ位点包括两对不完全反向重复序列和中间的回文序列，单链可形成茎环结构，ａａＣ也含有４个ＩｎｔＩ结合结构域。就Ｉ类整合子而言，基因重组可在任何一对ａｔｔ位点发生，但各个ａｔｔ位点上的发生频率存在很大差异…】。Ｉｎｔｌｌ也可以识别Ⅱ类和Ⅲ类整合子中的ａｔｔｌ２和ａｔｔｌ３，但频率很低。根据整合酶催化的交换位点不同，整合过程分为特异性整合和非特异性整合。特异性整合是在整合酶催化作用下，将闭合环状基因盒以线性结构整合于特异交换位点ａｔｔＩ和ａｔｔＣ。此过程是可逆的，耐药基因可被自由地整合与剪切。被切下后，由于其两端特殊结构，又恢复为环状，并可整合于其他整合子上。通过这种位点特异性重组，耐药基因从一个整合子传递到另一个整合子上，完成整合子中耐药基因的积累、重排和流动，从而使细菌形成了多重耐药性。非特异性整合是将耐药基因盒整合到ａｔｔＩ和ａｔｔＣ以外的第二位点（又称非特异性交换位点）。这种整合发生频率很低，基因盒的表达需依赖于整合子上适当方向的启动子，且因其周围只有一个重组位点而不能被切除。但细菌一旦整合上基因，就永久地获得了新基因。因此，非特异性整合对基因组在细菌中传播、细菌基因组、质粒、转座子进化方面具有重要意义。３．２基因盒的表达大多数基因盒没有自己的启动子，在１个整合子中，基因盒往往以５’一３’方向插入，这有利于基因盒借助５＇－ＣＳ上游启动子Ｐａｎｔ而得以表达，这种情况类似于操纵子结构。部分整合子在Ｐａｎｔ下游还有启动子Ｐ２。目前共发现４种Ｐａｎｔ和２种Ｐ２。Ｐａｎｔ分为强、弱和杂交型３种，弱Ｐａｎｔ与Ｐ２有关。Ｐａｎｔ可单独起作用，也可与Ｐ２联合起作用。Ｐ２以灭活形式和活性形式两种方式存在ｌ灭活形式的Ｐ２，・３５和・１０区之间间隔１４个碱基，不利于表达，当一３５区和・１０区之间插入３个碱基时，间隔区变为１７个碱基，形成了有活性的启动子。ａａｄＡＪ的转录可由强Ｐａｎｔ、弱Ｐａｎｔ或弱Ｐａｎｔ与Ｐ２联合介导，当由弱Ｐａｎｔ与Ｐ２联合介导时，转录起始于Ｐ２，且Ｐ２起主要作用。对强Ｐａｎｔ和Ｐ２联合介导的表达进行研究，但强度还没有确定【１２】。少数基因盒具有自己的启动子，如ｃｍｌＡ，ｃｍｌＡ２和ｑａｃＥ等【１３１。位于同一整合子上的多个基因盒，其相关基因万方数据２５７的表达水平是不同的，受到多种因素影响，主要有以下几点：（１）基因盒上游启动子Ｐａｎｔ或Ｐ２的强弱。不同整合子中启动子的结构与强度不同，Ｐａｎｔ是主要的启动子ｌ（２）基因盒在整合子上的位置。与５’一ＣＳ直接相连的基因盒表达最强，而下游的表达相对较弱。且同一基因盒在不同位点时表达水平也不同，这可能与基因盒ａｔｔＣ内含有不完全方向重复序列容易形成茎环结构成为转录终止的信号有关，（３）耐药基因盒的数量，（４）上游基因盒的性质。对于非特异性整合的基因盒是否表达要看其上游是否具有适当的启动子；（５）位于下游表达较弱或不表达的基因盒，在抗生素选择压力下，有可能借助于整合酶重组作用插入到强启动子或靠近Ｐａｎｔ的位置，由低水平表达转为高水平表达，耐药水平上升。此外，Ｉ类整合子Ｐａｎｔ和Ｐｉｎｔ转录方向相对，转录产物有一段互补序列，可能对基因盒和整合酶之间的表达起着作用。４整合子与细菌多重耐药性的关系细菌耐药性产生的原因之一是由于获得外源耐药基因，大多数耐药基因位于质粒，转座子、噬菌体及整合子等可转移遗传因子上。整合子本身不能移动，但可整合到质粒或染色体上，或自身作为转座子的组成部分使耐药基因在种内和种间进行转移。因此整合子系统对于研究细菌的耐药性显得尤为重要，目前整合子与细菌耐药性的关系研究已成为热点【１４】。在国外，不仅从临床菌株，而且从环境和牲畜分离的菌株中都检测到了整合子介导细菌耐药性的存在【１５】。我国从沙门菌中也检测到了第一类整合子【１６】，并证实携带有整台子的菌株要比不携带整合子的菌株更容易产生多重耐药性【１７】。Ｋｒａｕｌａｎｄ等［１８１对全球范围内整合子介导的沙门菌耐药性进行研究，从４个８个国家的９０株沙门菌中发现４种整合子，并且许多菌株的整合子携带有相似的基因盒，它们对沙门菌耐药基因在全球范围内克隆表达和水平转移发挥重要作用。Ｊｉａｎｇ等【１９１利用琼脂稀释法、ＰＦＧＥ法、ＰＣＲ技术及ＤＮＡ测序法对甘肃人民医院病房内多重耐药鲍曼不动杆菌与耐药性及整合子之间的关系进行了研究，发现鲍曼不动杆菌具有高度耐药性，且整合子都携带ａａｄＡＪ，ａａｄＡ５．ａａｃＡ４，ａａｃ３，ｃａｔＢ８，ａａｃＣＪ、ａａｃ陋７）一Ｉｂ，ｄｒｆＡＪ７和ｄｒｆ８基因，这表明多重耐药鲍曼不动杆菌在医院内广泛分布，且整合子与其耐药性密切相关２５８ＹＵ等【２０】利用ＰＣＲ技术和Ｋ—Ｂ法对复旦大学儿童医院福氏志贺菌中Ｉ类整合子流行情况及整合子与细菌耐药性的关系进行研究发现，５１株福氏志贺菌中，４６株（９０．２％）携带ｉｎｔＩ基因，２２株（４３．１％）携带有Ｉ类整合子，携带ｉｎｔＩ基因的４６株福氏志贺菌中２２株显示ｑａｃＥ阳性，携带Ｉ类整合子的菌株对氨苄西林和氯霉素耐药率远高于未携带Ｉ类整合子的菌株，这表明儿童中福氏志贺菌Ｉ类整合子携带率比较高，且Ｉ类整合子的携带和细菌耐药性密切相关。Ｅｒｗｉｎ等１２１】从９９名慢性耳炎儿童患者中分离出肠杆菌，将其随机分为用药组和安慰剂组，利用药物菌耐药性及整合子阳性率的影响，结果发现，６周以后，用药组６７％具有耐药性，整合子阳性率为７９％，而安慰剂组１７％具有耐药，整合子阳性率仅为２２％，１２周以后，用药组和安慰剂组耐药率分别为９１％和产生耐药性的重要因素，同时也表明细菌耐药性与整合子密切相关。Ｊｕｂｅｌｌｅ等［２２蜊用ＰＦＧＥ对澳大利亚不同医院近几因表达提供启动子，当然Ｉ类整合子还携带其他耐药整合子不仅存在于肠杆菌和其他革兰阴性茵中，Ｎａｎｄｉ等［２４】研究发现革兰阳性菌中也存在大量整整合子是细菌的ＤＮＡ片段，多聚酶链式反应肖增璜等１２５１根据ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ内的第一、二和三万方数据ＷｏｒｌｄＮｏｔｅｓｏｎＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２００９，Ｖ０１．３０，Ｎｏ．６因的多重ＰＣＲ方法。李心晖等【２６１根据整合酶基因的保守序列，设计了简并引物检测临床分离的革兰阴性杆菌携带的３类整合酶基因，并使用ＨｉｎｆＩ和Ａｖａｉｌ两种性核酸内切酶对ＰＣＲ产物进行酶切分析，根据酶切片段大小来判断所携带整合酶的类型，为全面细致研究整合子介导的细菌耐药提供了一种快速、简便的方法。实时ＰＣＲ方法使整合子检测更快捷【２”，该法不需经过ＤＮＡ的纯化，不失为一种很有前景的快速价廉的整合子检测筛选方法。除ＰＣＲ技术外，还有２种比较常见的方法：（１）运用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ—ｂｌｏｔ技术１２８】，根据常见基因盒的种类设计探针，经，：Ｐ标记后，与转入尼龙膜的待测耐药菌株的基因组ＤＮＡ酶切片段作ＤＮＡ．ＤＮＡ杂交，判断细菌有无整合子及相应的基因盒存在。结合ＰＣＲ结果绘制整合子图谱；（２）应用脉冲场凝胶电泳技术，根据许多整合子的已知酶切位点，用Ｘ—ｂａｌ等进行酶切，确定整合子的来源，或将酶切片段克隆到质粒上，建立的重组体可用于对整合子所含各个基因盒的功能进行分析。但这些方法目前还仅用于研究，尚不能用于临床常规检测。因此，仍需建立更为理想且经济实用的检测方法来检测整合子及其携带的耐药基因。６结语整合子的发现一方面为细菌耐药性的控制带来困难，另一方面也为细菌耐药机制的研究提供了新的思路。随着研究的深入，还有许多方面需要进一步探讨：（１）整合子整合和剪切基因盒的确切机制有待体外整合和剪切反应体系的建立；（２）整合子中基因盒的来源及其关系，（３）宿主因子对基因盒表达的影响；（４）整合子３’端ＯＲＦ的功能和作用Ｉ（５）快速简便的整合子检测方法的建立等。对整合子的进一步研究将有助于对细菌耐药机制的深入理解，以指导临床合理使用抗生素，也为新抗生素的研发提供了新途径。参考文献【１】ＨａｌｌＲＭ，ＣｏｌｌｉｓＣＭ．Ｍｏｂｉｌｅｇｅｎｅｃａｓｓｅｔｔｅｓａｎｄｉｎｔｅ－ｇｒｏｎｓ：ｃａｐｔｕｒｅａｎｄｓｐｒｅａｄｏｆｇｅｎｅｓｂｙｓｉｔｅ・－ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅ－－ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９５，１５（４）：５９３【２】ＳｔｏｋｅｓＨＷ，ＨａｌｌＲＭ．Ａｎｏｖｅｌｆａｍｉｌｙｏｆｐｏｔｅｎ．ｔｉａｌｌｙｍｏｂｉｌｅＤＮＡｅｌｅｍｅｎｔｓｅｎｃｏｄｉｎｇｓｉｔｅｓｐｅ—ｃｉｆｉｃｇｅｎｅｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓ：ｉｎｔｅｇｒｏｎｓ【Ｊ】．ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９８９，３（１２）：１６６９【３】ＳｕｎｄｅＭ，ＮｏｒｄｓｔｒｏｍＭ。Ｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ敏感试验测定甲氧苄啶和新诺明长时间使用对肠杆２１％，整合子盛行，这充分表明抗生素使用是细菌年耐药鲍曼不动杆菌进行检测，发现所有对碳青霉烯酶耐药菌株中Ｉ类整合子都带有ｂｌａｏＹ柚，基因，且ｂｌａｏｘＡ＿２，都与ＩＳＡｂａｌ相邻，ＩＳＡｂａｌ被认为是为耐药基基因，在其他不相关的菌株中也发现有相同的基因盒，甚至建议把Ｉ类整合子的存在作为鲍曼不动杆菌是否耐药的标志【２３】，说明耐药基因在整合子作用下可发生水平转移。合子，并且其整合子内的基因盒表达水平高于肠杆菌。对整合子的深入研究为阐明细菌耐药性机制以及耐药基因在种内和种间传播提供新思路，对预防和控制耐药基因的水平传播具有重要作用。５整合子的检测方法（ＰＣＲ）技术是检测整合子的一种重要的分子生物学方法，ＰＣＲ技术根据整合子各部分（如５’Ｃ５、可变区、３’．ｃｓ）设计寡聚核苷酸引物，进行扩增、测序、酶切，确认整合子的存在和所带基因盒种类及位置。类的整合酶基因序列，通过对３类整合酶基因序列的多重比对分析，分别设计出第一、二和三类的特异性引物，建立同时能检测第一、二和三类整合酶基国外医药抗生素分册２００９年第３０卷第６期ｂｅｔｗｅｅｎａｎｄｃｏｎｊｕｇａｌｔｒａｎｓｆｅｒｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＮｏｒｗｅｇｉａｎｍｅａｔａｎｄｍｅａｔｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，．２００６，５８（４）：７４１【４】ＳａｂａｔｄＭ，ＰｒａｔｓＧ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｉｒｉｔｅ－ｇｒｏｎｓ［Ｊ］．ＥｎｆｅｒｍＩｎｆｅｃｃＭｉｃｒｏｂｉｏｌＣｌｉｎ，２００２．，２０（７）：３４１【５】ＢｏｙｄＤ，ＰｅｔｅｒｓＧＡ，ＣｌｏｅｃｋａｅｒｔＡ，ｅｔａ１．Ｃｏｍｐｌｅｔｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａ４３一ｋｉｌｏｂａｓｅｇｅｎｏｍｉｃｉｓｌａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｇｉｏｎｏｆＳａ／ｍｏｎｅＨａｅｎｔｃｒｉｃａｓｅｒｏｖａｒｒｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＤＴ１０４ａｎｄｉｔｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｐｈａｇｅｔｙｐｅＤＴｌ２０ａｎｄｓｅｒｏｖａｒＡｇｏｎａ［Ｊ］．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２００１，１８３（９）：５７２５［６】ＯｈＪＹ，ＹｕＨＳ，ＫｉｍＳＫ，ｅｔａ１．ＣｈａｎｇｅｓｉｎｐａｔｔｅｒｎｓｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｉｎｔｅｇｒｏｎｃａｒｒｉｇｅａｍｏｎｇｓｈｉｇｅｌｌａｓｏｎｎｅｉｉｓａｌａｔｅｓｆｒｏｍｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｎＫｏｒｅａｄｕｒｉｎｇｅｐｉｄｅｍｉｃｐｅｒｉｏｄｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，４１（１）：４２１［７】ＡｒａｋａｗａＹ，ＭｕｒａｋａｍｉＭ，ＳｕｚｕｋｉＫ，ｅｔａ１．Ａｎｏｖｅｌｉｎ．－ｔｅｇｒｏｎｌｉｋｅｅｌｅｍｅｎｔｃａｒｒｙｉｎｇｔｈｅｍｅｔａｌｌｏ一６・ｌａｃｔａｍａｓｅｇｅｎｅｂＪａ脚［Ｊ】．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９５，３９（７）：１６１２［８】ＭａｚｅｌＤ，ＤｙｃｈｉｎｃｏＢ，ＷｅｂｂＶＡ，ｅｔａ１．ＡｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅｃｌａｓｓｏｆｉｎｔｅｇｒｏｎｉｎｔｈｅＶｉｂｒｉｏｃｈｌｏｅｒａｅｇｅｎｏｍｅ［Ｊ］．Ｓｃｉ－ｅｎｃｅ，１９９８，２８０（５３６３）：６０５［９】ＳｔｏｋｅｓＨＷ’Ｏ７ＧｏｒｍａｎＤＢ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆ５９．ｂａｓｅｅｌｅｍｅｎｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｉｔｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｍｏｂｉｌｅｇｅｎｅｃａｓｓｅｔｔｅｓ［Ｊ】．ＭｏｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，，１９９７，２６（４）：７３１【１０】ＧｒａｖｅｌＡ，ＦｏｕｒｎｉｅｒＢ，ＲｏｙＰＨ．ＤＮＡｃｏｍｐｌｅｘｅｓｏｂ－ｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｔｅｇｒｏｎｉｎｔｅｇｒａｓｅＩｎｔＩ１ａｔｔｈｅａｔｔＩ１ｓｉｔｅ［Ｊ］．ＮｕｃｌＡｃｉｄｓＲｅｓ，１９９８，２６（１９）：４３４７【１１】ＦｒａｎｃｉａＭＶＡｖｉｌａＰ’ＦｄｅｌａＣ．ＡｈｏｔｓｐｏｔｉｎｐｌａｓｍｉｄＦｆｏｒＳｉｔｅ一．ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｍｅｄｉａｔｅｄｂｙＴｎ２１ｉｎｔｅ・・ｇｒｏｎｉｎｔｅｇｒａｓｅ［Ｊ］．ＪＢａｃｔｅｒｉｏｌ，１９９７，１７９（１３）：４４１９【１２】ＰｏｕｒｎａｒａｓＳ，ＩｋｏｎｏｍｉｄｉｓＡ，ＴｚｏｕｖｅｌｅｋｉｓＬＳ，ｅｔａ１．ＶＩＭ一１２．ａｎｏｖｅｌｐｌａｓｍｉｄ－ｍｅｄｉａｔｅｄｍｅｔａｌｌｏ－Ｂ－ｌａｃｔａｍａｓｅｆｒｏｍＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｔｈａｔｒｅｓｅｍｂｌｅｓａＶＩＭ一１／ＶＩＭ一２ｈｙｂｒｉｄ［Ｊ】．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．，２００５，Ａ９：５１５３【１３】ＰｌｏｙＭＣ，ＣｏｕｒｖａｌｉｎＰ，ＬａｍｂｅｒｔＴ－ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＩｎ４０ｏｆＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓＢＭ２６８８，ａｃｌａｓｓ１ｉｎｔｅ—ｇｒｏｎｗｉｔｈｔｗｏｎｅｗｇｅｎｅｃａｓｓｅｔｔｅｓ，ｃｍｌＡ２ａｎｄｑａｃＦ［Ｊ］．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９８，４２（１０）：２５５７【１４】ＶｏＡＴ，ｖａｎＤｕｉｊｋｅｒｅｎＥ，ＦｌｕｉｔＡＣ，ｅｔａ１．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ。ｉｎｔｅｇｒｏｎｓａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａｇｅｎｏｍｉｅｉｓ—万方数据２５９ｌａｎｄｌａｍｏｎｇｎｏｎ—ｔｙｐｈｏｉｄａｌＳａｌｍｏｎｅｌｌａｓｅＦｏｖａｆ￥ｉｎＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ【Ｊ】．ＩｎｔＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓ，２００６，２８（３）：１７２【１５】ＲｏｅＭＴ，ＶｅｇａＥ，ＰｉｌｌａｉＳＤ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍａｒｋｅｒｓｏｆｃｌａｓｓ１ａｎｄｃｌａｓｓ２ｉｎｔｅｇｒｏｎ－－ｂｅａｒｉｎｇｅｓｃｈｅｒｉ・・ｃｈｉａｃｏｌｉｆｒｏｍｉｒｒｉｇａｔｉｏｎｗａｔｅｒａｎｄｓｅｄｉｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２００３，９（７）：８２２［１６】张宏梅，石磊，李琳，等．沙门菌中第一类整合子的鉴定及特性分析【Ｊ】．中华微生物学和免疫学杂志，２００４，２４（３）：２１４【１７】许宏涛，陈东科，张秀珍．多重耐药绿脓假单胞菌中Ｉ类整合子的研究ｍ．中华检验医学杂志，２００５，２８（７）：７２１【１８】Ｌｅｖｅｒｓｔｅｉｎ．－ｖａｎＨａｌｌＭＡ，ＢｌｏｋＨＥＭ，ＤｏｎｄｅｒｓＡＲＴ，ｅｔａ１．ＭｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｍｏｎｇＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅｉｓｓｔｒｏｎｇｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｉｎｔｅｇｒｏｎｓａｎｄｉｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆｓｐｅｃｉｅｓｏｒｉｓｏｌａｔｅｏｒｉｇｉｎｔＪ］．ＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２００３，１８７（２）：２５ｌ【１９】ＪｉａｎｇＬＹ，ＸｕｅＸＤ，ＷｅｉＬＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｇｒｏｎ，ｈｏｍｏｌｏｇｙａｎｄｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆｃａｒｂａｐｅｎｅｍａｓｅｓｉｎｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｂｕｒｎｗｏｕｎｄ．【Ｊ】．ＺｈｏｎｇｈｕａＳｈａｏＳｈａｎｇＺａＺｈｉ，２００８，２４（６）：４３２［２０】ＹｕＨ，ＷａｎｇＸＨ，ＹｅＹＺ，ｅｔａ１．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｌａｓｓＩｉｎｔｅ－－ｇｒｏｎａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｔｏａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＳｈｂ－ｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ［Ｊ］．ＺｈｏｎｇｈｕａＥｒＫｅＺａＺｈｉ，２００６，４４（９）：６８０【２１】ＶｅｅｎＥＬ，ＳｃｈｉｌｄｅｒＡＧＭ，ＴｉｍｍｅｒｓＴＫ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｏｎｇ－－ｔｅｒｍｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ／ｓｕｌｆａｍｅｔｈ・－ｏｘａｚｏｌｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｎｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅａｎｄｉｎｔｅｇｒｏｎｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｆｌｏｒａ：ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ—ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｔｒｉａｌｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ［Ｊ］．ＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，．２００９，６３：１０１１【２２］ＶａｌｅｎｚｕｅｌａＪＫ，．ＴｈｏｍａｓＬ，ＰａｒｔｒｉｄｇｅＳＲ，ｅｔａ１．Ｈｏｒｉｚｏｎ．・ｔａｌｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｉｎａｐｏｌｙｃｌｏｎａｌｏｕｔｂｒｅａｋｏｆｃａｒｂａｐｅｎ－－ｅｍ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏ．・ｂｉｏｌ，２００７，４５：４５３【２３】ＴｕｒｔｏｎＪＦ，ＫａｎｆｍａｎｎＭＥ，ＧｌｏｖｅｒＪ，ｅｔａ１．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｔｙｐｉｎｇｏｆｉｎｔｅｇｒｏｎｓｉｎｅｐｉｄｅｍｉｃｓｔｒａｉｎｓｏｆＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＫｉｎｇｄｏｍ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉ．－ｃｒｏｂｉｏｌ，２００５，４３：３０７４【２４】ＮａｎｄｉＳ，ＭａｕｒｅｒＪＪ，ＨｏｆａｃｒｅＣ，ｅｔａ１．Ｇｒａｍ—ｐｏｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａａｒｅａｍａｊｏｒｒｅｓｅｒｖｏｉｒｏｆＣｌａｓｓ１ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅ．ｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｅｇｒｏｎｓｉｎｐｏｕｌｔｒｙｌｉｔｔｅｒ【Ｊ】．ＰＮＡＳ，２００４，１０１（下转第２６３页）国外医药抗生素分册２００９年第３０卷第６期２６３３结语计算机辅助设计是多学科交融、互动的前沿领【７】粱峰，李科，李国秀．基于结构的ＨＩＶ－１整合酶抑制剂设计【Ｊ】．药学进展，２００３，２７（６）：３７８【８】ＹｕａｎＨ，ＰａｒｒｉｌｌＡＬ．ＱＳＡＲｓｔｕｄｉｅｓｏｆＨＩＶ－Ｉ域，包括数学、物理、化学，以及高、精、尖、理化测试技术、计算机科学；涉及到生命科学中生物化学，分子生物学，结构分子生物学，酶学、病理ｉｎｔｅｇｒａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ［Ｊ】．ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍ，２００２，１０（１２）：４１６９【９】ＭａｋｈｉｊａＭＴ＇ＫｕｌｋａｒｕｉＶＭ．３Ｄ－ＱＳＡＲａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｅｌｉｎｇｏｆＨＩＶ－１ｉｎｔｅｇｒａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ】．ＪＣｏｍｐｕｔＡｉｄｅｄＭｏｌＤｅｓ，２００２，１６（３）：１８１学、遗传学，进化生物学，生物信息学各个学科，需要对大量的生物信息和化学信息在高性能计算环境进行处理，并产生大量高技术软件和近代药物。［１０】ＭａｋｈｉｊａＭＴ，ＫｕｌｋａｒｎｉＶＭ．ＥｉｇｅｎＨＩＶ－１ｉｎｔｅｇｒａｓｅｖａｌｕｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＳｃｉ，计算机辅助药物分子设计具有巨大的科学价值和经济效益，因此，在学科建设中是具有战略性、前瞻性意义、是处于国际学科发展前沿，有望实现重大突破的新兴学科。而ＨＩＶ病毒、流行感冒病毒等蔓延之快，变化之快给我们的防治工作带来难题，虽然现已开发的药物确实减少了病毒感染，但不能根除病毒。这些病毒对现有的治疗药物不断产生耐药性，以及对人体产生严重的不良反应，所以临床迫切需要新的抗病毒药物。因此利用计算机辅助开发相关酶抑制剂将成为我们的主要研究手段，同时也具有非常重要的意义。ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ【Ｊ】．ＪＣｈｅｍＩｎｆＣｏｍｐｕｔ２００１，４ｌ（６）：１５６９【１１】ＪｏｃｈｍａｎｓＤ．ＮｏｖｅｌＨＩＶ・１ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｅｒｉｐｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ】ＶｉｒｕｓＲｅｓ，２００８，１３４（１－２）：１７１［１２】Ｌｅｉｔ蠢ｏＡ，ＡｎｄｒｉｃｏｐｕｌｏＡＤ，ＭｏｎｔａｎａｒｉＣＡ．ＩｎｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＨＩＶ－１ａｎｄｐｒｏｔｅａｓｅｓｉｌｉｃｏｎｏｎ—ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ【Ｊ】．ＥｕｒＪＭｅｄＣｈｅｍ，２００８，４３：１４１２【ｌ３】Ｐ６ｐｅＧ，ＣｏｕｒｃａｍｂｅｃｋＪ，ＰｅｒｂｏｓｔＨＩＶ－１ｐｒｏｔｅａｓｅｃｌｉｎｇＲ，ｅｔａ１．ＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｙＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｏｄ・Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（ＭＭＰｓ）ｕｓｉｎｇＧｅｎＭｏｌ—ｓｏｆｔｗａｒｅ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ，２００８，４３：２５１８ｐｏ－ＥｕｒＪＭｅｄ参考文献【１】李洪林，沈建华，罗小民，等．虚拟筛选与新药发现【Ｊ】．生命科学，２００５，ｌ７（２）：１２５【２】李利华，赵蔡斌，闵锁田，等．基于配体一受体理论的计算机辅助药物分子设计方法及应用［Ｊ】．西北药学杂志，２００７，２２（５）：２８２【１４】ＫｒｕｅｇｅｒＡＣ，ＸｕＹ，ＫａｒｌｗＭ．ｅｔａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｅｎｔｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅｉｎｆｌｕｅｎｚａｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍＬｅｔｔ，２００８，ｌ８（５）：１６９２【１５】ＤｅｙｄｅＶＭ，Ｏｋｏｍｏ－ＡｄｈｉａｍｂｏＭ，ＳｈｅｕＴＧ，ｅｔｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｅｎｚａＡａｓａａ１．Ｐｙ－ｔｏｏｌｔｏｄｅｔｅｃｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｏｆｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｉｎｓｅａｓｏｎａｌｉｎｆｌｕ－Ａｎｔｉｖｉｒａｌ【３］乔静．计算机辅助全新药物分子设计的研究［Ｊ】．内肛科技，２００８（７）：９６【４】陈安进，石杰．计算机辅助药物设计中用于建模的计算ｖｉｒｕｓｅｓ【Ｊ］ＪＲｅｓ，２００９，８１（１）：１６ａ１．Ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，【１６】ＺｈａｎｇＪ，ＷａｎｇＱ，ＦａｎｇＨ，ｅｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄＳＡＲｓｔｕｄｉｅｓｏｆｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃＰ・・ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓａｓ方法研究进展【Ｊ】冲国海洋大学学报，２００５，３５（３）：４０７【５】叶德举，罗小民，沈建华，等．先导化合物的发现一整合计算机虚拟筛选、化学合成和生物测试方法【Ｊ】．化学进展，２００７，１９（１２）：１９３９【６】ＣｏｃｏｈｏｂａＪ，ＤｏｎｇＢＪ．Ｒａｌｔｅｇｒａｖｉｒ：ｔｈｅｆｉｒｓｔｇｒａｓｅＨＩＶｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅｉｎ・・ｈｉｂｉｔｏｒｓ【Ｊ】ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍ，２００８，１６：３８３９【１７】ＭｉｔｒａｓｉｎｏｖｉｃＰＭ．Ｏｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ—ｂａｓｅｄａｄｅｓｉｇｎｏｆｎｏｖ—ｅｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＨ５Ｎ１ｉｎｆｌｕｅｎｚａｉｎｔｅ－ｖｉｒｕｓｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ（ＮＡ）【Ｊ］ＢｉｏｐｈｙｌＣｈｅｍ，２００９，１４０：３５ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ［Ｊ］．ＣｌｉｎＴｈｅｒ，２００８，３０（１０）：１７４７（上接第２５９页）（１８）：７１１８【２５】肖增，璜邱春，嫦石磊，等．多重ＰＣＲ筛选临床细菌耐药整合子基因［Ｊ】．暨南大学学报，２００５，２６（４）：４８０【２６】李心晖，石磊，杨维青，等．三类整合酶基因（ｉｎｔＩ）的简并引物ＰＣＲ方法建立及应用【Ｊ】．中华微生物学和免疫学杂志，２００５，２５（２）：ｌ５６【２７】ＬｉｅｂａｎａＥ，ＣｌｏｕｔｉｎｇｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｃｌａｓｓＩｉｎｔｅｇｒｏｎｉｎＳａＩｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｎｃａｆｒｏｍｆａｒｍａｎｉｍａｌｓｉｎＥｎｇｌａｎｄａｎｄＷａｌｅｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４０（４）：１４８１【２８】ＷａｃｈｉｎｏＪ，ＤｏｉＹ＇ＹａｍａｎｅＫ．ＮｏｓｏｃｏｍｉａｌｓｐｒｅａｄｏｆｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅｒｅｓｉｓｔａｎｔＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｓｔｒａｉｎｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇｎｅｏｎａｔａｌＡｇｅｎｔｓａｎｏｖｅｌｃｌａｓｓｂｅｔａ—ｌａｃｔａｍａｓｅ，ＧＥＳ一３，ｉｎｃａｒｅａＣ，ＣａｓｓａｒＣＡ，ｅｔａ１．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｉｎｔｅｎｓｉｖｅｕｎｉｔｉｎＪａｐａｎ［Ｊ］．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｏｆｇｙｒＡｍｕｔａｔｉｏｎｓ，ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｈｅＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００４，４８（６）：１９６０万方数据